II. Cara Memperbanyak Starter (Bibit) Agens Hayati
Ir. Tin Setiatin**
2.1. Persiapan / Sterilisasi
- Sterilisasi ruangan (incase) dilakukan dengan bahan kimia (alkohol 70% / etanol, formalin 4%).
- Sterilisasi alat dilakukan dengan menggunakan oven atau autoclave untuk tabung reaksi, petridish, pinset dan pisau kecil sedangkan untuk jarum ose digunakan api bunsen / lilin.
- Sterilisasi bahan menggunakan bahan-bahan kimia seperti klorok 1%, atau alkohol 70% untuk serangga terinfeksi (spesimen), sedangkan untuk media agar menggunakan dandang pada kompor atau autoclave.
2.2. Membuat Media PSA (PotatoSukrosa Agar)
a. Bahan-bahan Pembuatan Media Agar (PSA)
- 4 bks agar swallow ( 28 gram)
- 30 gram gula pasir
- 1,5 liter aquadest
- 300 gram kentang
b. Cara kerja Pembuatan Media agar
- Kentang dikupas, diiris-iris lalu dicuci bersih dan ditiriskan.
- Aquades dipanaskan sampai mendidih lalu masukkan kentang biarkan 15 menit
- Angkat lalu disaring menjadi ekstrak kentang
- Panaskan lagi ekstrak dan tambahkan gula pasir diaduk sampai rata.
- Larutan disaring lagi.
- Panaskan dengan api yang kecil dan masukan agar sedikit sedikit jangan ada gumpalan-gumpalan.
- Setelah larutan homogen, diangkat untuk mencegah kontaminasi, dapat ditambahkan antibiotik, misalnya Penicilin/streptomycin
- Media agar dimasukan ke dalam petridish dan tabung reaksi, kemudian tutup rapat.
- Media agar disterilkan pada dandang (di kukus menggunakan kompor) selama 1 –2 jam , atau pada Autoclave dengan suhu 1200C, tekanan 1 atmosfir selama 20 menit
- Diangkat dan untuk tabung reaksi disimpan miring.
- Disimpan di tempat yang bersih.
2.3. Perbanyakan Isolat pada Media Agar Miring
• Bahan dan Alat
- Bibit / Isolat ( Cendawan dan Bakteri )
- Media agar miring (PSA)
- Alkohol 70%
- Incase / ruang isolasi
- Api bunsen / lilin
• Cara Kerja
- Sterilkan ruang isolasi (incase), jarum ose dan bersihkan tangan dengan alkohol 70%
- Masukkan tabung-tabung media PSA, juga tabung isolat / bibit.
- Nyalakan api bunsen / lilin.
- Jepit tabung PSA diantara jari-jari tangan kiri, lalu cabut tutupnya dan mulut tabung didekatkan pada api.
- Ambil tabung isolat, tutupnya dicabut /dijepit dengan jari-jari tangan kanan.
- Panaskan jarum ose sampai membara lalu dinginkan pada tabung PSA, dan masukkan lagi ke tabung isolat untuk mengambil sporanya secara hati-hati atau Isolat Bakteri untuk dipindahkan pada tabung PSA (jarum digoreskan pada agar miring). Untuk Starter Bakteri jarum ose digoreskan pada agar miring dengan membentuk spiral.
- Tutup kedua mulut tabung tadi dengan rapat.
- Panaskan kembali jarung ose, simpan di atas petridish (bisa berisi alkohol 70%).
- Tuliskan nama cendawan atau Bakteri Agens Hayati yang diperbanyak dan tanggal pembuatannya (inokulasi) lalu letakkan pada rak tabung.
- Disimpan pada suhu kamar dalam ruangan yang bersih. Setelah 4-7 hari bisa digunakan untuk perbanyakan massal pada media padat atau digunakan untuk starter (bibit).
Read More
